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PCR實驗分區少不了掌上離心機

发布时间:2021-4-14 10:42:10??????点击:

  掌上離心機也可以稱爲迷你離心機,用于微量實驗。

  常見得應用有:

  1、全血中提取血清。

  2、各種樣品提取上清液。

  3、樣品快速沈降。

  4、微量血細胞分離。

  5、微生物樣品處理。

  6、PCR實驗分區離心。

  以最後一個實驗爲例,

  了解PCR實驗分區就要先了解氣溶膠,氣溶膠是由固體或液體小質點分散並懸浮在氣體介質中形成的膠體分散體系,在氣體與液體面摩擦時,操作時比較劇烈地搖動反應管,離心機離心,擴增後PCR産物開蓋時、吸樣時及移液器槍反複吹吸樣品時都可形成氣溶膠而汙染。

  綜上所述,爲了得到好的實驗結果,PCR反應需要進行嚴格的實驗分區:

  常規需要設置3個獨立的分區:試劑耗材儲存與准備區、樣品處理和樣品制備區,擴增檢測區,各區域空間完全獨立;實驗室實施空氣流向控制,擴增前和擴增後區域應具有獨立的通風系統,擴增後區域保持負壓狀態,其他區域保持常壓,防止擴增産物進入擴增前的區域。

  PCR實驗防止汙染的方法:

  (一)合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行,特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应 与其它步骤严格分开。zui好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用,实验前应将实 验室用紫外线消毒以破坏残留的DNA或RNA。

  (二)吸樣槍:吸樣槍汙染是一個值得注意的問題。由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內或粘上槍頭是一個嚴重的汙染源,因而加樣或吸取模板核酸時要十分小心,吸樣要慢,吸樣時盡量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉汙染或産生氣溶膠汙染。

  (三)預混和分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應小量分裝,如有可能,PCR反應液應預先配制好,然後小量分裝,-20℃保存。以減少重複加樣次數,避免汙染機會。另外,PCR試劑,PCR反應液應與樣品及PCR産物分開保存,不應放于同一冰盒或同一冰箱。

  (四)防止操作人員汙染,使用一次性手套、吸頭、小離心管應一次性使用。

  (五)設立適當的陽性對照和陰性對照,陽性對照以能出現擴增條帶的zui低量的標准病原體核酸爲宜,並注意交叉汙染的可能性,每次反應都應有一管不加模板的試劑對照及相應不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。

  (六)減少PCR循環次數,只要PCR産物達到檢測水平就適可而止。

  (七)選擇質量好的離心機管,以避免樣本外溢及外來核酸的進入,打開離心管前應先離心,將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。開管動作要輕,以防管內液體濺出。

  PCR实验分区仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和掌上離心機等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。


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